骆驼重组SpaA-N单域抗体的制备与性质研究

• 作者: 夏雪琴 庆格乐图 李江伟 杨春静 芦清霞
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 单域抗体 SpaA-N 亲和淘洗 热稳定性 骆驼
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 抗体工程
• 页码范围: 55-58
• 分类号: Q789
• 语种: 中文

摘要

目的:获得特异识别SpaA-N的单域抗体.方法:用His-SpaA-N重组抗原从新疆双峰驼单域抗体噬菌体展示文库中,筛选SpaA-N的结合子.经测序后亚克隆至pET30a并在E coli BL21高表达,用镍离子亲和层析柱纯化.ELISA分析重组单域抗体的热稳定性,Western blot检测结合特异性.结果:经His-SpaA-N筛选富集后,筛选得到2个目的克隆.构建至pET30a,PCR和酶切鉴定目的基因大小与预计相符.SDS-PAGE显示,Mr29 000和23 000有特异性目的条带.ELISA检测显示,抗SpaA-N的VHH对SpaA-N重组蛋白具有很好的结合活性；VHH热变性后,经室温复性均可以恢复其抗原结合活性.Western blot显示,重组VHH在Mr66 000处可以识别丹毒丝菌中存在的表面蛋白.结论:获得了具有热稳定性和特异结合SpaA-N的单域抗体,为进一步研究spaA抗原在丹毒丝菌感染免疫中的作用提供了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李江伟	新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室	25	65	5.0	7.0
2	夏雪琴	新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室	8	29	4.0	5.0
3	芦清霞	新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室	3	1	1.0	1.0
4	庆格乐图	新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室	3	7	1.0	2.0
5	杨春静	新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室	4	5	1.0	2.0