H5N1亚型禽流感病毒NS1蛋白多克隆抗体的制备及鉴定

• 作者: 丁航 张志珍 李观强 林东子 贺贞 马卫列
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 禽流感病毒 NS1 融合蛋白 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2012,（16）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 1691-1694
• 分类号: R373.13|R392.7
• 语种: 中文

摘要

目的 获取H5N1亚型禽流感病毒NS1蛋白的多克隆抗血清,制备NS1蛋白的多克隆抗体.方法 利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白GST-NS1,采用Glutathione-sepharose 4B亲和层析纯化融合蛋白.纯化的GST-NS1蛋白以不同剂量皮下注射免疫BALB/c小鼠,收集抗血清,采用Protein A-sepharose和CNBr-sepharose 4B亲和层析从抗血清中纯化抗NS1蛋白的多克隆抗体.Western blot和免疫荧光法鉴定多克隆抗体的特异性,酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗体的效价.结果 SDS-PAGE结果表明,融合蛋白GST-NS1以可溶形式表达,诱导4h的表达量占细菌可溶性蛋白的32.6％,融合蛋白的纯度达到90％以上.Western blot分析显示,亲和层析制备的多克隆抗体对NS1蛋白具有高度特异性.ELISA结果表明,皮下注射25、50、100 μg GST-NS1融合蛋白的BALB/c小鼠血清光密度D(450)值均明显增高(P＜0.01),其滴度达到1∶3200.免疫荧光观察到病毒感染的A549细胞中,有内源性NS1蛋白的表达.结论 成功地从抗血清中制备出NS1蛋白的多克隆抗体,制备的抗体具有高度特异性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张志珍	广东医学院生物化学与分子生物学教研室	29	51	4.0	5.0
2	丁航	广东医学院生物化学与分子生物学教研室	61	503	13.0	20.0
3	李观强	深圳市龙岗区人民医院检验科	31	193	8.0	12.0
4	马卫列	广东医学院生物化学与分子生物学教研室	22	39	4.0	5.0
5	林东子	东莞市慢性病防治院检验科	10	26	3.0	4.0
6	贺贞	广东医学院生物化学与分子生物学教研室	2	3	1.0	1.0