猪源牛病毒性腹泻病毒SD0803株E2蛋白的表达及抗体制备

• 作者: 孙春清 张宏彪 张荣 文心田 曹三杰 童光志 蔺涛 袁世山 邓宇 郑浩 黄律 龙进学
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 牛病毒性腹泻病毒 E2蛋白 抗体制备
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 31-35
• 分类号: Q786
• 字数: 3941字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2012.04.007

摘要

表达去除SD0803 E2基因跨膜疏水区的sE2蛋白并制备其抗体,为猪源BVDV诊断奠定基础.RT-PCR扩增SD0803株sE2基因,构建重组原核表达载体pGEX-4T-1-sE2,转化BL21(DE3),IPTG诱导蛋白表达,以纯化的重组蛋白为抗原免疫家兔制备多克隆抗体.采用间接ELISA、Western blot、间接免疫荧光等方法鉴定获得的抗体.结果显示,抗体效价最高可达1∶256 000;制备的抗体可与rsE2蛋白特异性结合；该抗体可特异性识别BVDV感染MDBK细胞表达的E2蛋白,显示抗体高度的特异性.成功构建pGEX-4T-1-sE2原核表达质粒,诱导其表达的蛋白免疫家兔,成功制备的猪源BVDV SD0803株E2抗体.