牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的克隆、表达及多克隆抗体制备

• 作者: 张生英 张阳阳 胡永浩 邢小勇 陈文龙
• 来源期刊: 吉林大学学报（理学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 牛病毒性腹泻病毒 E2基因 E2蛋白 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 生命科学
• 页码范围: 711-717
• 页数: 7页
• 分类号: Q819
• 字数: 4603字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13413/j.cnki.jdxblxb.2019323

摘要

利用原核系统表达牛病毒性腹泻病毒(BVDV)E2蛋白,制备鼠源多克隆抗体.通过MDBK细胞增殖病毒,提取RNA,RT-PCR扩增E2全长基因,进行生物信息学分析后设计截短引物,构建优化表达载体pET-30-E2,转化BL21,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达;用SDS-PAGE电泳分析蛋白表达,纯化蛋白联合弗氏佐剂免疫小鼠;用酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定抗体效价水平,用免疫印迹(WB)和免疫荧光(IFA)法验证抗体特异性.结果表明:E2基因在大肠杆菌中成功表达,蛋白大小为32000,不可溶形式表达,表达量为0.4 mg/mL;多克隆抗体效价为1:256000,可特异性结合重组蛋白及细胞中的病毒.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡永浩	甘肃农业大学动物医学院	96	391	9.0	16.0
2	邢小勇	甘肃农业大学动物医学院	42	49	4.0	4.0
3	张生英	甘肃农业大学动物医学院	4	1	1.0	1.0
4	张阳阳	甘肃农业大学动物医学院	12	17	2.0	4.0
5	陈文龙	甘肃农业大学动物医学院	1	0	0.0	0.0