牛病毒性腹泻病毒E1蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

• 作者: 康彪 殷宏 独军政 田占成 胡永浩 高闪电
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 牛病毒性腹泻病毒 E1蛋白 表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2018,（11）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 30-34
• 页数: 5页
• 分类号: S852.653
• 字数: 4054字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2018.11.006

摘要

利用原核表达系统表达牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的E1蛋白,以制备抗E1多克隆抗体.根据E1蛋白的编码序列,设计一对特异性引物,利用PCR扩增BVDV E1片段,定向插入pPROEX-HTb载体中,转化大肠埃希菌BL21感受态细胞,筛选获得阳性重组菌,以IPTG进行诱导表达、金属离子层析法纯化获得分子质量为23 ku的重组E1蛋白.利用纯化的E1重组蛋白经3次免疫新西兰白兔后收获多克隆抗体,间接ELISA检测多克隆抗体效价达到1:12800以上.间接免疫荧光试验证实多克隆抗体可与细胞中的BVDV抗原发生反应,具有良好的反应性和特异性.成功制备了BVDV重组E1蛋白的兔源多克隆抗体,为BVDV的检测和E1蛋白功能的研究奠定了基础.