小麦WPBF与高分子量谷蛋白基因上游Prolamin-Like box的特异结合

• 作者: 单丽伟 卫晓彬 唐如春 张超 王亚楠 范三红
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 小麦 WPBF 表达纯化 HMW-GS Prolamin-Like box 凝胶迁移阻滞试验
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子遗传学
• 页码范围: 7-15
• 分类号: S512.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.01.002

摘要

[目的]克隆普通小麦胚乳特异表达转录因子基因WPBF,对其原核表达条件进行优化,并验证其编码蛋白和小麦高分子量谷蛋白亚基基因(HMW-GS)上游Prolamin-Like box的结合特性,为小麦HMW-GS表达调控机制的阐明奠定基础.[方法]利用RT-PCR扩增得到WPBF编码区,将其连接到pET-21a-MBP载体中,并分别在E.coli T7 Express和Origami B(DE3)菌株中诱导表达.依次利用Amylose和Ni-NTA亲和层析柱纯化重组蛋白,最后通过凝胶迁移阻滞试验(EMSA)对重组蛋白的DNA结合特性进行分析.[结果]在33℃的Origami B(DE3)菌株中表达含MBP和His双标签的重组WPBF大部分以可溶性形式存在,其表达量占细菌总蛋白的48.0％.重组WPBF和含HMW-GS上游Prolamin-Like box的两类DNA探针能发生特异结合,但重组WPBF和含“TGCAAAG”基序DNA探针的结合强度高于其和含“TGCAAG”基序DNA探针的结合.[结论]建立了优化的WPBF原核表达系统,并获得具有生物活性的重组蛋白；重组WPBF能与HMW-GS启动子来源的两种Prolamin-Like box特异性结合,但结合能力存在差异.