NSP4基因突变的重组牛轮状病毒的拯救及其鉴定

• 作者: 仲跻峰 何洪彬 杨宏军 杨少华 陈方园 高运东
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: 轮状病毒 反向遗传技术 NSP4基因
• 年，卷（期）: 2012,（19）
• 所属期刊栏目: 兽医
• 页码范围: 4102-4108
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.19.023

摘要

[目的]通过反向遗传技术结合RNAi筛选和蚀斑克隆方法,拯救出毒力减弱的轮状病毒(rotavirus,RV). [方法]以野生型轮状病毒CHLY基因组RNA为模板,通过重叠PCR方法在NSP4基因93-104 nt引入5个沉默突变核苷酸,并将毒力位点区135aa、136aa和138aa对应的核苷酸进行定向突变,构建了含有突变位点的转录质粒△pT7-NSP4/89/M.将该质粒与携带RNA聚合酶基因的重组质粒pcDNA3.1/T7-RNAP共转染己接种野生型RV病毒的MA104细胞单层,继续培养24 h,获得了携带NSP4变异基因的RV病毒粒子和野生型RV病毒粒子的混合病毒.将获得的混合病毒接种MA104细胞,通过RNA干扰和蚀斑克隆方法逐步筛选纯化以获得拯救RV. [结果]成功拯救出了NSP4基因变异的RV,该病毒在MA104细胞上的病变和致乳鼠腹泻效果较野生型RV明显减弱.[结论]通过反向遗传技术结合RNAi筛选和蚀斑克隆方法成功拯救出毒力减弱的RV;NSP4毒力位点135aa、136aa和138aa的变异对RV毒力改变和腹泻严重程度有影响.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	仲跻峰	山东省农业科学院奶牛研究中心	137	888	15.0	20.0
2	高运东	山东省农业科学院奶牛研究中心	72	515	12.0	18.0
3	杨宏军	山东省农业科学院奶牛研究中心	52	203	9.0	11.0
4	何洪彬	山东省农业科学院奶牛研究中心	59	320	10.0	13.0
5	陈方园	山东省农业科学院奶牛研究中心	1	2	1.0	1.0