小鼠截短型CDC25B蛋白PKA体外磷酸化分析

• 作者: 于秉治 刘超 宗志红 张哲 肖建英 范会瑜
• 来源期刊: 中国公共卫生
• 学科: 医学
• 关键词: 小鼠 CDC25B PKA 体外磷酸化
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 488-490
• 分类号: R329
• 语种: 中文

摘要

目的 通过体外磷酸化研究和放射自显影技术证实小鼠CDC25B蛋白是蛋白激酶A(PKA)的直接作用底物.方法 构建小鼠截短型pGEx-4T-2-CDC25B201原核表达载体,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,glutathione Sepharose 4B亲和层析纯化CDC25B蛋白,与PKA进行体外磷酸化反应,分别采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、蛋白免疫印迹(western blot)和放射自显影鉴定CDC25B是否为PKA直接磷酸化底物.结果 在E.coli BL21细胞内,采用0.1 mmol/L的IPTG在27℃条件下诱导表达3h即可达到较高表达水平；SDS-PAGE显示在约50kD处有明显GST-CDC25B201融合蛋白特异条带；放射自显影显示GST-CDC25B201融合蛋白的磷酸化条带大约位于55 kD处；Western blot分析,在重组质粒表达的总蛋白、载体表达的GST蛋白、纯化蛋白及磷酸化蛋白的相应位置均出现GST抗体的杂交条带.结论 小鼠CDC25B蛋白是PKA的直接作用底物.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张哲	中国医科大学生物化学与分子生物学教研室	90	220	7.0	10.0
2	宗志红	中国医科大学生物化学与分子生物学教研室	71	463	11.0	16.0
3	于秉治	中国医科大学生物化学与分子生物学教研室	85	378	10.0	15.0
4	刘超	中国医科大学生物化学与分子生物学教研室	46	230	7.0	14.0
6	肖建英	中国医科大学生物化学与分子生物学教研室	70	272	9.0	12.0
8	范会瑜	中国医科大学生物化学与分子生物学教研室	2	11	1.0	2.0