趋化因子受体7基因绿色荧光慢病毒载体构建及在未成熟树突状细胞中的表达

• 作者: 宋立孝 张璞 徐开林 曾令宇 李德鹏 潘秀英 陈翀 黄一虹
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 趋化因子受体7 未成熟树突状细胞 慢病毒载体 真核表达 组织工程
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 134-138
• 分类号: R394.2
• 字数: 5296字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2012.01.029

摘要

背景:趋化因子受体7(chemokine receptor-7,CCR7)是树突状细胞从外周迁移至淋巴系统发挥作用的最重要的启动和调节者,但未成熟树突状细胞表面不表达CCR7,因此利用携带CCR7基因的未成熟树突状细胞可以更好地诱导免疫耐受.目的:构建携带小鼠CCR7基因的绿色荧光蛋白重组慢病毒载体,观察其在未成熟树突状细胞中的表达.方法:采用RT-PCR扩增小鼠CCR7基因并克隆至pCR-Blunt载体.将CCR7 DNA片段及IRES-GFP连入慢病毒转移质粒LV-Lac,生成重组慢病毒质粒LV-CCR7.采用脂质体转染法将慢病毒系统3质粒(重组慢病毒质粒LV-CCR7、包装质粒ΔNRF及包膜质粒pVSVG)共转染包装慢病毒,重组慢病毒感染未成熟树突状细胞,光学显微镜观察细胞状态,流式细胞术鉴定CCR7蛋白的表达.结果与结论:实验成功扩增出小鼠CCR7 DNA片段并克隆至pCR-Blunt载体,亚克隆构建慢病毒表达载体LV-CCR7,经3质粒包装系统感染293 FT细胞后,24 h于荧光显微镜下均观察到绿色荧光蛋白阳性表达,病毒滴度为108 U/L以上,获得携带CCR7基因的重组慢病毒.慢病毒颗粒可有效感染未成熟树突状细胞,荧光显微镜可见大量GFP蛋白表达,阳性细胞达50%,流式细胞术检测到CCR7蛋白表达,LV-CCR7基因修饰的未成熟树突状细胞仍保持在未成熟状态.结果证实,实验成功构建携带小鼠CCR7基因绿色荧光慢病毒载体LV-CCR7,并可在未成熟树突状细胞细胞中表达.