染色质体外组装相关蛋白的表达纯化及组装体系的建立

• 作者: 代辉 张业 沈翊琲 赵吉成 赵忠亮
• 来源期刊: 医学研究杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 组蛋白 ACF NAP -1 染色质组装
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 19-23
• 分类号: R346
• 字数: 5342字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-548X.2012.01.007

摘要

目的 提取并纯化真核细胞核内组蛋白,表达并纯化重组组蛋白、染色质组装相关因子NAP-1(nuc1ear assembly protein -1)及ACF( ATP - utilizing chromatin assembly and remodeling factor),并建立无细胞体外染色质组装体系.方法 在大肠杆菌BL21中表达并应用离子交换层析纯化组蛋白,从真核细胞HeLa细胞核中提取并应用羟基磷灰石纯化组蛋白八聚体,利用杆状病毒表达系统在昆虫细胞Sf9中表达并纯化组装相关因子,应用纯化得到的蛋白在适宜条件下进行染色质体外组装,并用微球菌核酸酶酶切检测.结果 获得了高纯度的原核表达的组蛋白,真核细胞组蛋白八聚体及组蛋白特异伴侣NAP -1和ACF；建立了由质粒DNA、纯化的真核细胞核内重组组蛋白、重组NAP-1、重组ACF及ATP为核心成分的体外染色质组装的无细胞系统,经微球菌核酸酶检测组装成功.结论 利用体外分离纯化的多种重组蛋白,可成功构建基因的染色质模板,为在体外染色质模板上进行基因转录的调控机制研究奠定了基础.