人源抗恶性疟原虫单链抗体库的制备及鉴定

• 作者: 何光志 俞琦 吴玛莉 奚锦 安传伟 曹峰 李世军 王乾宇 王平 王文佳 田维毅 蔡琨 邓树轩 韩洁 高英 黄高
• 来源期刊: 现代预防医学
• 学科: 医学
• 关键词: 恶性疟原虫 单链抗体 制备及筛选
• 年，卷（期）: 2012,（11）
• 所属期刊栏目: 实验技术及其应用
• 页码范围: 2803-2805,2813
• 分类号: R382.3+1
• 语种: 中文

摘要

目的 通过噬菌体展示技术构建人源抗恶性疟原虫单链抗体库(ScFv),从中筛选出高亲和力的抗体基因片段,为进一步单链抗体表达打下基础.方法 收集患者新鲜外周血,进行淋巴细胞分离和总RNA的提取,提取总RNA经RT-PCR扩增出入源抗体重链和轻链抗体库,采用用重叠延伸拼接法将VH与VL以Linker相连组装成单链抗体基因(ScFv),将ScFv基因片段连接至载体pCANTAB5E,转化大肠杆菌TG1感受态细胞,构建的鼠源性抗恶性疟原虫天然噬菌体抗体库.结果 从20个噬菌体克隆中筛选到15个具有弓形虫可溶性抗原结合活性的阳性克隆.结论 从外周血淋巴细胞中获取可变区基因,利用噬菌体抗体库技术制备人源抗恶性疟原虫单链抗体的策略是可行的.