胡椒SRAP反应体系的建立和优化

• 作者: 刘进平 姜艳
• 来源期刊: 中国农学通报
• 学科: 农学
• 关键词: 胡椒 SRAP 分子标记 PCR扩增
• 年，卷（期）: 2012,（31）
• 所属期刊栏目: 园艺—研究报告
• 页码范围: 141-145
• 页数: 5页
• 分类号: S59|S573+.9
• 字数: 3666字
• 语种: 中文

摘要

建立并优化胡椒SRAP分子标记体系,为海南胡椒属植物亲缘关系和遗传多态性分析、物种和品种鉴定等打下技术基础.利用单因素随机试验对胡椒SRAP-PCR反应体系中各组分(Taq DNA聚合酶、dNTP、模板DNA、引物和Mg2+)的浓度进行优化,同时筛选SRAP-PCR反应的循环数和最适退火温度.通过实验确定了SRAP-PCR反应体系为:反应总体系为20μL,其中引物0.35 μmol/L,TaqDNA聚合酶1.0U,dNTP 0.6mmol/L,Mg2+ 1.5 mmol/L,模板DNA 25～200 ng,同时通过梯度PCR试验,确定引物最佳退火温度；最佳SRAP-PCR反应程序为:94℃预变性5 min；94℃变性30 s,35℃退火30 s,72℃延伸45 s,5个循环；然后94℃变性30 s,48℃退火30 s,72℃延伸45 s,40个循环；最后72℃延伸7 min,4℃保存.SRAP-PCR体系适为胡椒属植物遗传多样性分析奠定了基础,并成功地应用于海南胡椒属植物亲缘关系和遗传多态性分析.