柑橘转基因成分多重PCR检测体系的建立

• 作者: 何永睿 姚利晓 彭爱红 李政利 邹修平 陈善春
• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 多重PCR 正交试验 检测 转基因成分
• 年，卷（期）: 2012,（16）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 8845-8849
• 分类号: S188+.1
• 字数: 4796字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0517-6611.2012.16.018

摘要

[目的]建立柑橘转基因成分的多重PCR检测体系.[方法]根据GenBank中pBI121质粒序列和柑橘(Citrus.)Actin基因序列,分别设计CaMV35S启动子、NOS启动子、NOS终止子特异引物和Actin基因的特异引物,建立能同时检测出4种序列的多重PCR检测体系,同时通过正交试验确定该体系的最佳引物浓度和比例及PCR反应体系中各因素的 浓度及反应程序,并对该方法的灵敏度进行验证.[结果]试验得到的最佳MPCR反应体系为:10 ×buffer 2.5μl.25 mmol/L MgCl2 2.0μl;dNTP Mixture(2.5 mmol/L each)2.0μl,10μmol/L的Actin基因、35S启动子、NOS启动子、NOS终止子引物分别加入1.0、1.0、1.5、0.5μl,模板DNA 0.1μl,Taq DNA聚合酶1.25U,加ddH20至25μl.PCR反应程序为:94℃预变性5 min;94℃30 s,64.1 ℃45s,72℃ 50s,31个循环;72℃10 min.试验中,经正交优化后的4重PCR反应灵敏度达0.1％.[结论]该研究建立的MPCR检测体系,理论上已能满足柑橘或其深加工产品的转基因成分检测.