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摘要:
目的 构建携带人活化转录因子6(activating transcription factor 6,ATF6)的重组腺病毒,观察其对软骨细胞C28I2增殖及凋亡的影响.方法 将ATF6基因克隆入pAdTrack-cmv质粒,经pmeⅠ线性化后的重组穿梭质粒pAdTrack-ATF6通过电转法与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183感受态中同源重组,挑选阳性克隆,获得重组腺病毒质粒pAd-ATF6.通过脂质体介导转染HEK-293细胞,得到重组腺病毒Ad-ATF6,并采用PCR法对重组腺病毒进行鉴定.Ad-ATF6感染软骨细胞C28I2,通过Western印迹检测ATF6的表达,并应用流式细胞仪检测Ad-ATF6对C28I2细胞增殖和凋亡的影响.结果 成功构建了携带人ATF6基因的重组腺病毒质粒,并成功包装了具有高效感染力的Ad-ATF6腺病毒.Western印迹结果表明,Ad-ATF6感染组ATF6的表达明显增加.FCM检测结果表明,Ad-ATF6处理组G1期的细胞比例分别比NC组和Ad-GFP组高28.42 %和30.50 %(P<0.5),S期的细胞比例分别比NC组和Ad-GFP组低22.43 %和24.10 %(P<0.5);凋亡率比NC组和Ad-GFP组高出21.98 %和19.65 %(P<0.5).结论 可高表达ATF6的腺病毒包装成功,感染C28I2细胞后,抑制了C28I2细胞的增殖并促进其凋亡,为后续研究ATF6基因的生物学功能奠定了基础,为与内质网应激相关的软骨发育疾病提供了一定的参考价值.
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激活转录因子6(ATF6)
内质网应激
短发夹RNA(shRNA)
慢病毒
内容分析
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文献信息
篇名 携人ATF6重组腺病毒载体的构建及对C28I2细胞增殖及凋亡的影响
来源期刊 医学分子生物学杂志 学科 医学
关键词 人活化转录因子6 重组腺病毒 C28I2细胞 细胞增殖凋亡
年,卷(期) 2013,(4) 所属期刊栏目 论著
研究方向 页码范围 187-192
页数 6页 分类号 R373
字数 4114字 语种 中文
DOI 10.3870/j.issn.1672-8009.2013.04.001
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研究主题发展历程
节点文献
人活化转录因子6
重组腺病毒
C28I2细胞
细胞增殖凋亡
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
医学分子生物学杂志
双月刊
1672-8009
42-1720/R
大16开
武汉市航空路13号
38-35
1978
chi
出版文献量(篇)
2127
总下载数(次)
4
总被引数(次)
8829
相关基金
国家自然科学基金
英文译名:the National Natural Science Foundation of China
官方网址:http://www.nsfc.gov.cn/
项目类型:青年科学基金项目(面上项目)
学科类型:数理科学
论文1v1指导