人卵泡抑素基因短发夹RNA表达质粒的构建及其干扰效果的初步鉴定

• 作者: 叶健 梁方方 江如兰 莫毅 谢丹尼 陈月凤
• 来源期刊: 中国计划生育学杂志
• 关键词: 卵泡抑素基因 RNA干扰 小发夹RNA
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 231-233
• 页数: 3页
• 字数: 2055字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-8189.2013.04

摘要

目的:构建人卵泡抑素(FS)基因短发夹RNA(shRNA)真核表达质粒,并瞬时转染方式初步鉴定其干扰效果.方法:依据GenBank数据库提供的人FS基因mRNA核苷酸序列,利用Ambion网站上siRNA软件设计shRNA干扰靶序列,将该序列克隆到线性化的pLKO.1质粒载体上,构建pLKO.1-FS-shRNA重组质粒,并进行酶切和测序鉴定.确认质粒构建成功后,用脂质体(LipofectamineTM2000)将重组质粒瞬时转染3AO人卵巢癌细胞系,并用实时定量反转录PCR法检测重组质粒对FS基因的表达抑制效果.结果:构建的shRNA序列经DNA测序证实与设计序列完全一致；实时定量反转录PCR结果显示pLKO.1-FS-shRNA重组质粒瞬时转染的3AO人卵巢癌细胞后,细胞中的FS基因转录受到抑制,抑制率达59％.结论:成功构建了靶向人FS基因的shRNA干扰靶序列重组质粒(PLKO.1-FS-shRNA),转染后对人卵巢癌细胞系FS基因的表达具抑制效果,该实验为进一步研究FS基因的生物学功能奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	叶健		18	33	3.0	5.0
2	莫毅		46	261	9.0	14.0
3	梁方方		10	32	4.0	5.0
4	谢丹尼		31	186	8.0	13.0
5	陈月凤	广西壮族自治区医科大学研究生院	1	0	0.0	0.0
6	江如兰		1	0	0.0	0.0