三疣梭子蟹C-型溶菌酶基因的原核表达与活性检测

• 作者: 岳峰 张辉 潘鲁青
• 来源期刊: 中国海洋大学学报（自然科学版）
• 学科: 地球科学
• 关键词: 三疣梭子蟹 C-型溶菌酶 原核表达 抑菌活性
• 年，卷（期）: 2013,（7）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 23-27
• 页数: 5页
• 分类号: X835
• 字数: 4184字
• 语种: 中文

摘要

溶菌酶能破坏和消除侵入体内的病原或异物,是甲壳动物免疫系统中一个重要的效应分子.本文根据克隆得到的三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)C-型溶菌酶基因(Lysozyme)全长序列,设计带有酶切位点的特异性引物,经RT-PCR扩增得到溶菌酶基因(PtLys)的开放性阅读框,将其克隆至载体pMD18-T,并测序.用限制性内切酶BamH I和Xho I 双酶切取目的基因,并与表达载体pET-28a(+)连接,构建了PtLys基因的原核表达载体p28a-PtLys,在大肠杆菌(E.coli) BL21(DE3)中诱导表达含6个His标签的重组PtLys融合蛋白,经带有His标签的Ni2+亲合层析柱纯化得到三疣梭子蟹重组溶菌酶蛋白,并进行活性检测.结果表明:重组载体p28a-PtLys转化E.coli BL21(DE3)后,可以实现PtLys基因的原核表达,经SDS-PAGE分析显示在33.29kD处有显著诱导条带,与预测的分子量大小基本一致；经Western blot分析,可与anti-His抗体特异性结合；抑菌实验表明,对溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)、哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)和鳗弧菌(Vibrio anguillarum)均有一定的抑菌作用.本研究成功实现了三疣梭子蟹C-型溶菌酶基因的原核表达,为甲壳动物溶菌酶的进一步开发应用提供了技术支持.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	潘鲁青	中国海洋大学海水养殖教育部重点实验室	102	1937	24.0	39.0
2	张辉	中国海洋大学海水养殖教育部重点实验室	16	198	7.0	14.0
3	岳峰	中国海洋大学海水养殖教育部重点实验室	4	58	4.0	4.0