三疣梭子蟹C-型凝集素的原核表达和活性检测

• 作者: 于金红 潘鲁青
• 来源期刊: 渔业科学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 三疣梭子蟹 C-型凝集素 原核表达 活性检测
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 58-63
• 页数: 6页
• 分类号: S96
• 字数: 4615字
• 语种: 中文

摘要

通过RT-PCR扩增三疣梭子蟹C-型凝集素(C-type lectin like-domain protein,CTLD)基因序列,将目的基因克隆入质粒pET32a,构建原核表达重组质粒pET32a-CTLD.将重组质粒转化入大肠杆菌BL21中,通过IPTG诱导CTLD的表达,对其表达产物进行SDS-PAGE和Western blot 检测.用His GraviTrap Ni亲和层析柱及超滤离心管纯化目的蛋白,并对其进行活性检验.结果表明,构建得到CTLD基因的原核表达载体,双酶切鉴定得到与预期片段相符的外源基因插入片段,经测序与目的序列完全一致;诱导表达出相对分子质量(M) 39 600的目的蛋白,经SDS-PAGE和Western blot检测,融合蛋白成功表达;重组C-型凝集素对兔的红细胞没有明显的凝集作用,但对小鼠红细胞的凝集效价是22,而对所选5种细菌的凝集作用存在差异,其中对大肠杆菌具有明显的凝集作用,而对溶藻弧菌、哈维氏弧菌、鳗弧菌和金黄色葡萄球菌均无凝集现象.本研究结果为进一步研究C-型凝集素在免疫防御中的作用与地位提供依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	潘鲁青	中国海洋大学海水养殖教育部重点实验室	102	1937	24.0	39.0
2	于金红	中国海洋大学海水养殖教育部重点实验室	2	14	2.0	2.0