木聚糖酶EvXyn11TS耐热性与其N端二硫键的相关性分析

• 作者: 吴静 张慧敏 李剑芳 邬敏辰 闵柔 高树娟
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 木聚糖酶 耐热性 N端二硫键 分子动力学模拟 定点突变
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 酶和蛋白质
• 页码范围: 346-353
• 分类号: Q936
• 语种: 中文

摘要

[目的]以糖苷水解酶11家族耐热木聚糖酶EvXyn11TS为研究对象,定点突变其编码基因Syxyn11,揭示EvXyn11TS耐热性与其N端二硫键的相关性.[方法]对不同来源的、与EvXyn11TS一级结构相似度较高的若干11家族木聚糖酶进行多序列同源比对,发现只有耐热的EvXyn11TS在其N端存在一个二硫键(Cys5-Cys32)；运用分子动力学模拟预测该N端二硫键存在与否对木聚糖酶热稳定性的影响.以人工合成的Syxyn11为母本,采用PCR技术将其编码Cys5的密码子TGT突变为编码Thr5的ACT,构建去除了N端二硫键的突变酶(EvXyn11M)的编码基因Syxyn11M；分别将Syxyn11和Syxyn11M在毕赤酵母GS115中进行表达,并分析表达产物EvXyn 11 TS和EvXyn11M的温度和pH特性.[结果]酶学性质研究结果表明:EvXyn11M的最适温度Topt由突变前的85℃降至70℃;EvXyn11TS在90℃的半衰期t1/290为32 min,而EvXyn11M在70℃的半衰期t1/270仅为8.0 min.[结论]运用分子动力学模拟预测了N端二硫键对EvXyn11TS耐热性的重要作用,并通过定点突变验证之,为其它与耐热EvXyn11TS一级结构相似的、11家族常温高比活性木聚糖酶的耐热性改造提供了新的技术策略.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邬敏辰	江南大学无锡医学院	163	1504	22.0	29.0
2	吴静	江南大学无锡医学院	29	177	8.0	12.0
3	李剑芳	江南大学食品学院	52	513	12.0	21.0
4	闵柔	江南大学药学院	5	45	3.0	5.0
5	张慧敏	江南大学食品学院	11	49	5.0	7.0
6	高树娟	江南大学药学院	3	25	3.0	3.0