沙地葡萄茎痘相关病毒的RT-LAMP检测方法

• 作者: 任芳 张尊平 朱红娟 胡国君 范旭东 董雅凤
• 来源期刊: 植物病理学报
• 学科: 农学
• 关键词: 少地葡萄茎痘相关病毒 逆反转录环介导恒温扩增技术 快速检测 反转录聚合酶链式反应
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 病原学
• 页码范围: 286-293
• 页数: 8页
• 分类号: S432.41
• 字数: 4104字
• 语种: 中文

摘要

本研究建立了一种用于沙地葡萄茎痘相关病毒(Grapevine rupestris stem pitting-associated virus,GRSPaV)的RT-LAMP 检测方法.以GRSPaV的RdRp基因序列(GenBank登录号:GQ478314)为靶序列,设计3组RT-LAMP引物,从中筛选出1组有效引物,并确定了适宜的反应温度和反应时间.对RT-LAMP产物进行HhaⅠ酶切,酶切片段与理论片段大小一致,证明了RT-LAMP产物的特异性.RT-LAMP方法能够检测出GRSPaV的RNA最大稀释倍数为10-4,与RT-PCR方法相比更为灵敏.田间葡萄样品RT-LAMP检测结果与已知样品带毒情况相同,表明RT-LAMP检测GRSPaV具有较好的可靠性.在RTLAMP反应产物中加入染料SYBR GreenⅠ(×1000)可直接观察反应结果.建立的GRSPaV RT-LAMP检测方法具有简便、快速、灵敏、可视化等特点,尤其适合基层使用,具有良好的应用前景.