大鼠TCF4和ΔTCF4重组腺病毒载体的构建和鉴定

• 作者: 叶荣 崔恒进 张焕相 徐晓静 王春燕 胡君
• 来源期刊: 江苏大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: T细胞因子4 腺病毒载体 间充质于细胞 细胞迁移
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 277-283
• 页数: 7页
• 分类号: R34|Q78
• 字数: 5888字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建腺病毒表达载体Ad-TCF4和Ad-ΔTCF4(缺失了β-catenin结合位点),并初步鉴定其在间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)中的表达,为进一步研究Wnt/β-catenin信号通路在MSCs中的功能以及应用MSCs进行干细胞移植和基因治疗奠定基础.方法:以MSCs的cDNA为模板,扩增TCF4和ΔTCF4基因,将基因序列定向克隆至穿梭质粒载体pShuttle-CMV后,转化含pAdEasy-1的BJ5183感受态细胞进行同源重组,获得重组腺病毒载体Ad-TCF4和Ad-ΔTCF4.PCR以及Pac Ⅰ酶切鉴定后,Ad-TCF4和Ad-ΔTCF4转染QBI-293A进行包装和扩增.检测重组载体的病毒滴度以及感染MSCs的最适病毒复数(multiplicity of infection,MOI),并探讨Ad-TCF4和Ad-ΔTCF4在MSCs中的表达以及对迁移的影响.结果:成功构建Ad-TCF4和Ad-ΔTCF4,病毒滴度分别为1.1×107 pfu/mL和1.3×107 pfu/mL,150 MOI病毒感染MSCs的效率达到90％以上;蛋白质印迹和TOPFlash/FOPFlash报告基因检测显示TCF4在MSCs中表达增加,并具有调节下游靶基因转录的活性;Boyden小室迁移实验发现感染Ad-ΔTCF4能显著抑制MSCs向LiCl的迁移能力,而感染Ad-TCF4并不能提高MSCs的迁移能力.结论:成功构建Ad-TCF4和Ad-ΔTCF4,能高效感染MSCs并正确表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	叶荣	苏州大学基础医学与生物科学学院细胞生物学系	14	110	7.0	10.0
2	徐晓静	苏州大学基础医学与生物科学学院细胞生物学系	13	26	2.0	4.0
3	崔恒进	苏州大学基础医学与生物科学学院细胞生物学系	3	1	1.0	1.0
4	王春燕	苏州大学基础医学与生物科学学院细胞生物学系	8	22	2.0	4.0
5	胡君	苏州大学基础医学与生物科学学院细胞生物学系	7	1	1.0	1.0
6	张焕相	苏州大学基础医学与生物科学学院细胞生物学系	29	102	5.0	9.0