芽胞杆菌(Bacillus sp.)YX-1耐有机溶剂葡萄糖脱氢酶的基因克隆与酶学性质

• 作者: 张波涛 张荣珍 徐岩 王磊
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 葡萄糖脱氢酶 辅酶再生 有机溶剂耐受性 底物特异性
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 所属期刊栏目: 酶和蛋白质
• 页码范围: 561-568
• 分类号: Q814
• 语种: 中文

摘要

[目的] 从芽胞杆菌(Bacillus sp.)YX-1基因组中克隆出一种有机溶剂耐受型的葡萄糖脱氢酶基因,实现了该基因在大肠杆菌中的高效表达,研究了重组蛋白的酶学性质.[方法] 依据芽胞杆菌属中葡萄糖脱氢酶氨基酸序列的保守性,设计合理引物,钓取来源于Bacillus sp.YX-1的葡萄糖脱氢酶基因,构建诱导型表达载体pET28a-gdh,于大肠杆菌中进行表达.镍柱亲和层析法纯化重组蛋白,考察了重组蛋白的酶学性质.[结果] 葡萄糖脱氢酶基因全长为786 bp,编码261个氨基酸.酶学研究结果表明:该酶最适反应温度为45℃,最适pH值为8.0；具有良好的有机溶剂耐受性,于50％的辛烷、环己烷、癸烷中室温放置1h后,酶活仍能保持90％以上；具有较宽的底物谱,对多种糖均具有一定的催化活性,其中催化D-葡萄糖的活力最高,产生还原型辅酶因子；对辅酶NADH和NADPH具有相似的依赖性,对NAD+和NADP+的催化比活分别为8.37 U/mg和8.62 U/mg.[结论]利用生物信息学成功地挖掘出Bacillus sp.YX-1一种耐有机溶剂的葡萄糖脱氢酶,为氧化还原酶在有机相反应中的的辅酶再生循环提供了新型的生物催化剂.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐岩	江南大学生物工程学院教育部工业生物技术重点实验室	233	3264	31.0	46.0
2	王磊	江南大学生物工程学院教育部工业生物技术重点实验室	16	74	5.0	7.0
3	张荣珍	江南大学生物工程学院教育部工业生物技术重点实验室	17	78	4.0	8.0
4	张波涛	江南大学生物工程学院教育部工业生物技术重点实验室	3	4	1.0	2.0