1种新型功能性杂交胰岛β细胞系的建立

• 作者: 刘永锋 康铁利 张佳林 张城硕 李乐 李晓航 石蕊 程颖 赵宁
• 来源期刊: 中国医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 胰岛移植 永生化 电融合 杂交胰岛β细胞系
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 143-148
• 页数: 6页
• 分类号: R318.15
• 字数: 3984字
• 语种: 中文

摘要

目的 通过应用基因转染及细胞融合技术构建永生化细胞,建立1种功能良好、无致瘤性、增殖可控的杂交胰岛β细胞系.方法 通过脂质体介导逆转录病毒载体SSR69转染至原代成纤维细胞中,筛选稳定表达SV40 LTag的永生化细胞.提取大鼠胰岛,通过胰蛋白酶及DNA酶裂解成单胰岛细胞.对永生化成纤维细胞及单个胰岛β细胞进行电融合,通过有限稀释法获得杂交胰岛β细胞克隆.比较杂交及正常β细胞内胰岛素的含量及对葡萄糖刺激胰岛素释放反应.通过RT-PCR及Western blot分析杂交胰岛β细胞中SV40 LTag、insulin、葡萄糖激酶(GK)及葡萄糖转运体-2(Glut-2)基因的表达.结果 建立的永生化成纤维细胞系的增殖能力明显优于原代成纤维细胞(P＜0.05).成功获得杂交胰岛β细胞克隆,其细胞呈短梭形或扁圆形,且具有贴壁生长等特性.透射电子显微镜下可见细胞内胰岛素分泌颗粒,杂交与正常胰岛β细胞之间细胞内胰岛素含量、胰岛素释放指数及insulin、GK、Glut-2蛋白及mRNA表达水平无统计学差异(P＞0.05),但2种细胞内insulin、GK、Glut-2的表达水平显著高于RIN-m5F细胞(P＜0.05).结论 可通过永生化成纤维细胞及单个胰岛β细胞电融合诱导生成杂交胰岛β细胞,且杂交细胞能够对葡萄糖的变化产生应答反应.