IDO基因重组慢病毒载体构建及其转染hUCMSCs细胞的实验研究

• 作者: 吴正中 张强 李玉云 李见 王露 翟玮玮
• 来源期刊: 华中科技大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 再生障碍性贫血 人脐带间充质干细胞 吲哚胺2,3-过氧化酶 绿色荧光蛋白 慢病毒载体
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 395-400,423
• 页数: 7页
• 分类号: R556.5
• 字数: 5906字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-0741.2013.04.005

摘要

目的 构建共同表达人吲哚胺2,3-过氧化酶(IDO)基因和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的慢病毒表达载体,探讨其在人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)中的表达,为下一步利用高表达IDO的hUCMSCs移植治疗再生障碍性贫血奠定实验基础.方法 将IDO基因克隆至慢病毒pGC-FU-EGFP表达载体中,通过PCR和测序鉴定获得连接正确的克隆.重组慢病毒表达载体质粒及辅助包装质粒共转染293T细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达情况;制备携带IDO基因的慢病毒Lentivirus-IDO,并测定重组慢病毒的滴度.用重组慢病毒以最佳MOI值感染hUCMSCs作为实验组,以空载体转染的hUCMSCs(空载体组)及未转染的hUCMSCs(未转染组)作为对照,应用RT-PCR 及Western blot法分别检测细胞中IDO mRNA及IDO蛋白水平的表达情况.结果 经PCR及基因测序鉴定pGC-FU-EGFP-IDO重组慢病毒表达载体构建成功,包装慢病毒Lentivirus-IDO滴度为2×108TU/mL.通过EGFP表达的阳性细胞数筛选其最适MOI为30,此时对细胞的转染效率可达到80%以上.RT-PCR检测显示实验组IDO mRNA 表达阳性,空载体组和未转染组均为阴性;Western blot检测示实验组细胞内IDO蛋白表达阳性,空载体组和未转染组均为阴性.结论 成功构建了人IDO基因的重组慢病毒表达载体,慢病毒Lentivirus-IDO能有效感染hUCMSCs,IDO蛋白可在hUCMSCs中长期、稳定表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李玉云	蚌埠医学院医学检验系临床检验诊断学实验中心	97	332	9.0	11.0
2	张强	蚌埠医学院医学检验系临床检验诊断学实验中心	35	154	6.0	11.0
3	王露	蚌埠医学院医学检验系临床检验诊断学实验中心	7	29	3.0	5.0
4	翟玮玮	蚌埠医学院医学检验系临床检验诊断学实验中心	6	34	3.0	5.0
5	吴正中	蚌埠医学院医学检验系临床检验诊断学实验中心	3	7	1.0	2.0
6	李见	蚌埠医学院医学检验系临床检验诊断学实验中心	7	14	3.0	3.0