猪流行性腹泻病毒HB/FN株S基因的克隆、原核表达及免疫原性分析

• 作者: 左玉柱 杨震 王晨枫 范京惠 裴丽华
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 猪流行性腹泻病毒 S基因 原核表达 免疫原性
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 21-25
• 页数: 5页
• 分类号: S852.659.6
• 字数: 4715字
• 语种: 中文

摘要

根据GenBank中登录的猪流行性腹泻病毒(PEDV)经典毒株的S基因序列并参照pMD19-T载体序列,设计了一对分别引入限制性内切酶BamH Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点的引物,PCR方法从猪流行性腹泻病毒HB/FN株中扩增得到一条1 080 bp的片段.将其连入pMD19-T载体中,经酶切鉴定并测序,测序结果和参考株S基因同源性高达100％.根据抗原性分析选择其抗原性较高的655 bp基因片段分别插入到pET-28a(+)、pET-32a(+)、pGEX-6p-1中,构建3种不同的原核表达载体,经合适条件的IPTG诱导后SDS-PAGE分析,结果显示S基因在3种表达载体中均能表达,在pET-28a(+)中表达量最高,表达产物分子质量约为25 ku.利用His标签的特性对重组蛋白进行纯化,Western blot证明蛋白可以与PEDV阳性血清产生特异性结合反应.用纯化的蛋白免疫小鼠,抗体检测显示S蛋白具有良好的免疫原性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	范京惠	河北农业大学动物科技学院	56	237	9.0	13.0
2	左玉柱	河北农业大学动物科技学院	86	419	10.0	17.0
3	裴丽华	河北农业大学动物科技学院	5	21	3.0	4.0
4	杨震	河北农业大学动物科技学院	4	21	3.0	4.0
5	王晨枫	河北农业大学动物科技学院	3	16	2.0	3.0