重组大鼠长链2-羟酸氧化酶的克隆与表达

• 来源期刊: 中国药学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 长链2-羟酸氧化酶 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 页码范围: 331-336
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 语种: 中文

摘要

目的克隆表达大鼠长链2一羟酸氧化酶.方法以鼠肾eDNA为模板,扩增大鼠长链2-羟酸氧化酶基因,连接到pET-28a(4-)载体上构建重组质粒pET28a-rHa02,转化表达宿主Rosetta(DE3).利用IPTG诱导重组蛋白的表达,并通过Ni柱纯化.通过监测DCIP在605nm处吸光度值的变化来测定其对经典底物的酶动力学参数,验证活性.结果成功构建了表达质粒pET28a-rHa02(β1)和pET28a-rHa02(β2),并诱导表达了大鼠长链2-羟酸氧化酶两种同工酶β1和β2,其对2-羟基辛酸的K分别为(25.1±1.9)和(24.6±1.2)μmol·L-1;对2-羟基异己酸的k分别为(24.6±2.3)和(22.4±1.6)μmol·L-1.结论成功克隆表达了大鼠长链2-羟酸氧化酶两种同工酶β1和β2获得了纯度高,活性好的重组酶,可为其体外底物及抑制剂的筛选提供模型.