基于EMA-qPCR的茄科青枯菌活体检测技术的建立

• 作者: 殷幼平 熊书 王中康 王芳
• 来源期刊: 微生物学通报
• 关键词: 茄科青枯菌 叠氮溴乙锭 活的非可培养状态 活体检测 实时荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2013,（9）
• 所属期刊栏目: 生物实验室
• 页码范围: 1723-1732
• 语种: 中文

摘要

[目的]利用特异性核酸染料叠氮溴乙锭(Ethidium monoazide bromide,EMA)与实时荧光定量PCR技术相结合,建立一种能有效区分青枯菌死活细胞的检测方法.[方法]样品DNA制备前经EMA渗透预处理,再进行实时荧光定量PCR特异扩增菌体DNA.[结果]终浓度为2.0 mg/L的EMA能有效排除1.0×107 CFU/mL灭活青枯菌细胞DNA的扩增,对活细胞和不可培养状态(Viable but non-culturable,VBNC)活菌的DNA扩增均没有影响.当每个定量PCR反应体系中的活细胞在5.0× 100-5.0×104 CFU范围内时,扩增Ct值与定量PCR反应体系中活细胞CFU对数值呈良好的负相关性(R2=0.992 5).比较EMA-qPCR法和平板计数法对经过不同温度短期保存的青枯菌检测结果发现,待检样品可在24℃与4℃冷藏条件下短期保存.[结论]本研究建立的EMA-qPCR方法能有效检测青枯菌VBNC细胞和有效区分死活菌,避免或减少青枯菌PCR检测的假阳性和假阴性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王中康	重庆大学生命科学学院重庆市杀虫真菌生物农药工程技术中心重庆市基因功能与调控重点实验室	57	766	16.0	25.0
2	殷幼平	重庆大学生命科学学院重庆市杀虫真菌生物农药工程技术中心重庆市基因功能与调控重点实验室	57	718	14.0	23.0
3	王芳	重庆大学生命科学学院重庆市杀虫真菌生物农药工程技术中心重庆市基因功能与调控重点实验室	19	172	6.0	13.0
4	熊书	重庆大学生命科学学院重庆市杀虫真菌生物农药工程技术中心重庆市基因功能与调控重点实验室	3	23	2.0	3.0