泡菜中乳酸菌活菌的EMA结合定量PCR检测方法的建立

• 作者: 戴蕴青 田文莹 石慧 程国灵 罗云波 翟百强 许文涛 黄昆仑
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 关键词: 泡菜 乳酸菌 活细胞 Ethidium bromide monoazide 聚合酶链式反应
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 技术改进
• 页码范围: 373-378
• 页数: 6页
• 字数: 3690字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2013.03.015

摘要

泡菜中乳酸菌(Lactobacillus plantarum)活菌的数量是评价其营养价值的重要指标.DNA染料(Ethidium bromide monoazide,EMA)结合定量PCR(EMA-qPCR)是一种定量活细胞快速有效的方法.本研究建立了快速精准的检测泡菜中乳酸菌活菌的EMA-qPCR方法.对于乳酸菌死菌,EMA浓度为10μg/mL时,△Ct值(经EMA处理-未经EMA处理)最大,而乳酸菌的△Ct值在不同EMA浓度下(10,25,50和l00 μg/mL)没有显著差异(P＞0.05).并且,随着10 μg/mL EMA的光活化时间由0 min增加到20 min,△Ct信也随之增加,但是这种现象没有在活细胞中产生,所以EMA处理不会影响活细胞计数.因此最适宜的EMA处理条件(10 μg/mL,光照20min)可以有效的区分乳酸菌活细胞和死细胞.在此条件下EMA-qPCR方法(活乳酸菌数量分别为109、108、107、106、105和104 CFU/mL)与平板计数法的检测结果相关性良好(R2=0.999),PCR效率为104％.由于泡菜中乳酸菌随着发酵时间延长会出现亚致死性损伤,EMA-qPCR方法会低估活菌的数量,在检测前将菌体在MRS培养基中孵育30 min会完全消除这种偏差.本实验建立的EMA-qPCR方法,可成功地检测不同发酵时间泡菜中乳酸菌活菌的数量.通过摸索适宜条件,这种检测死活菌的方法可应用到更多的食品与环境检测中.