采用慢病毒载体干扰ALDH-1表达的宫颈癌Hela细胞稳转株的构建及意义

• 作者: 刘龙阳 张丙忠 张帝开 易娟娟 林仲秋 梁金晓 陈勍 陈志辽
• 来源期刊: 国际妇产科学杂志
• 关键词: 氧化还原酶类 乙醛 慢病毒属 遗传载体 转染 HeLa细胞
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 565-567,封3
• 页数: 4页
• 字数: 2738字
• 语种: 中文

摘要

目的:采用干扰乙醛脱氢酶1(ALDH-1)表达的慢病毒载体转染宫颈癌Hela细胞,构建干扰ALDH-1表达的稳转株,以利进一步探讨干扰ALDH-1表达的宫颈癌Hela细胞株的生物学特性.方法:体外培养宫颈癌Hela细胞,加入梯度浓度的嘌呤霉素溶液进行筛选,确定最佳筛选浓度;取24孔板中对数生长的宫颈癌Hela细胞,吸弃旧培养液,加入400 μL新培养基,分别加入4种干扰慢病毒液(ALDH-1、ALDH1-1719、ALDH1-740、ALDH1-921,其中有一种具最佳干扰效果)及1种阴性对照慢病毒液(LV3-NC),同时均加入Polybrene液.其中5种慢病毒液的加入量均为50 μL(滴度均为1×108 TU/mL),Polybrene的加入量为0.5 μL(浓度为5 mg/L);24 h后换新鲜培养液,72 h后荧光显微镜下观察荧光表达情况.然后采用最佳筛选浓度的嘌呤霉素溶液进行筛选,以获得稳定转染的干扰ALDH-1表达的宫颈癌Hela细胞株.结果:确定嘌呤霉素的最佳筛选浓度为0.9 mg/L;5种慢病毒载体均成功转染入宫颈癌Hela细胞中,经嘌呤霉素筛选2周后成功获得稳定转染细胞株.结论:干扰ALDH-1表达的宫颈癌Hela细胞稳转株成功构建.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	林仲秋	中山大学孙逸仙纪念医院妇科肿瘤科	255	1293	18.0	25.0
2	张丙忠	中山大学孙逸仙纪念医院妇科肿瘤科	44	229	9.0	13.0
3	陈勍	中山大学孙逸仙纪念医院妇科肿瘤科	63	429	11.0	17.0
4	陈志辽	中山大学孙逸仙纪念医院妇科肿瘤科	48	150	8.0	11.0
5	张帝开	中山大学附属六院妇科	82	735	15.0	26.0
6	梁金晓	中山大学孙逸仙纪念医院妇科肿瘤科	11	71	5.0	8.0
7	刘龙阳	中山大学附属六院妇科	6	8	2.0	2.0
8	易娟娟	佛山市妇幼保健院皮肤性病科	5	10	2.0	3.0