禽呼肠孤病毒σ3蛋白单克隆抗体的制备及特性鉴定

• 作者: 刘加波 庞耀珊 范晴 谢丽基 谢志勤 谢芝勋 邓显文
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 禽呼肠孤病毒 σ3蛋白 单克隆抗体 制备 鉴定
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 页码范围: 135-139
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 4822字
• 语种: 中文

摘要

用体外表达的蛋白作为免疫原来制备特异的单克隆抗体,并对制备的抗体进行鉴定.将ARV σ3蛋白基因在体外扩增,扩增产物与载体PGEX-4T-1连接并在基因工程菌中表达,体外表达的蛋白经纯化后作为免疫原来制备特异的单克隆抗体和ELISA检测包被抗原,测定纯化后蛋白的浓度,按每鼠100 μg的蛋白用量免疫BALB/c小鼠,免疫4次后取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0按5∶1进行融合.对融合后的杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经3次有限稀释法克隆,通过间接E-LISA方法测定其抗体效价,并通过Western Blot、Dot-ELISA、直接免疫荧光、病毒中和等方法对获得的单抗特性进行检测.结果通过纯化的病毒含量为41.5 mg/mL,应用纯化的病毒免疫BALB /c小鼠后与骨髓瘤细胞融合,通过克隆筛选成功获得1株能稳定传代并分泌抗禽呼肠孤病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株σ3 B6-3 K3,用其制备的腹水经间接E-LISA测定效价达105以上,并且与其他参试病毒株没有交叉反应,具有良好的特异性；病毒中和试验证明其中和能力低.应用ARVσ3蛋白制备并获得的杂交瘤细胞株σ3 B6-3 K3具有很好的特异性,不具有中和ARV的关键表位,可以用于ARV的特异性检测.