改良消减杂交技术用以筛选差异表达非编码小RNA的应用初探

• 作者: 刘星 周天会 彭莉萍 王燕 罗镇明 陈锦珍
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 非编码小RNA 消减杂交 乳腺癌细胞
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 146-150
• 语种: 中文

摘要

旨在构建一种能快速、有效检测不同细胞中差异表达的非编码小RNA的方法.以乳腺癌细胞株MCF7和非癌乳腺上皮细胞HBL100为材料,用RNA分离试剂盒分离获得长度为18-100 nt的RNA片段,3'端添加poly(A)尾后利用smart技术进行反转录,在反转录体系中加入生物素标记的dATP,得到单链cDNA；结合生物素-磁珠分离技术将cDNA与待测RNA进行消减杂交并以U6为内参验证消减结果；最后利用巢式PCR扩增杂交产物,PCR产物插入T载体后,挑取阳性克隆进行测序.结果显示,总RNA按不同大小片段分离富集后通过聚丙烯酰胺凝胶电泳,于100 nt以下显示较亮条带；以U6为内参检测杂交效率,杂交后U6于33个循环时可见少量扩增条带；杂交产物经巢式PCR和电泳表明在100nt范围内有明显条带,得到差异表达的非编码小RNA.经过改良的消减杂交方法可以快速、有效的检测不同标本中差异表达的非编码小RNA.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王燕	遵义医学院珠海校区生化与细胞分子生物学教研室	33	91	5.0	6.0
2	陈锦珍	遵义医学院第五附属医院普外科	8	27	4.0	5.0
3	彭莉萍	遵义医学院珠海校区生化与细胞分子生物学教研室	5	10	2.0	3.0
4	刘星	遵义医学院珠海校区生化与细胞分子生物学教研室	13	24	3.0	4.0
5	罗镇明	遵义医学院珠海校区生化与细胞分子生物学教研室	2	3	1.0	1.0
6	周天会	遵义医学院珠海校区生化与细胞分子生物学教研室	1	0	0.0	0.0