慢病毒载体转染犬睾丸生殖细胞

• 作者: 李益琛 杜小燕 王洪军 赵明 陈振文 马啸
• 来源期刊: 实验动物科学
• 关键词: 比格犬 慢病毒载体 生殖细胞
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 6-10
• 页数: 5页
• 字数: 2933字
• 语种: 中文

摘要

目的 观察慢病毒载体(Lentiviral vector,LV)对犬生殖细胞的转染,为基于LV的精子介导法制备转基因动物提供依据.方法 采用睾丸打点注射法,向比格犬两侧睾丸分别注入滴度为5×108、1×108、2×107 TU/mL的慢病毒液组成3个剂量组,每点注射量为每只犬0.2 mL.于注射后第2周开始采集精液,通过精液DNA的PCR检测和精子荧光镜检评估绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的整合及表达.结果 1)在高剂量组,整合并表达GFP基因的精子于第4周首现并持续至第17周；在中、低剂量组于第5周首现,分别持续到第14周、12周.2)GFP表达的高峰期在注射后第7周～10周.3)GFP表达于整个精子,以顶体后区和精子尾颈部表达最强.4)注射后第2周～6周,中剂量组犬采精困难,高低剂量组犬精子畸形率有上升的趋势.5)在GFP表达的高峰期,绿色荧光精子的百分率在高、中、低剂量组分别为43.33％、35.53％和4.55％,具有明显的差异.结论 基于LV的精子介导转基因法(Sperm-mediated gene transfer,SMGT)可成功获得转基因犬精子,转基因阳性率、表达的强度与持续时间与慢病毒滴度相关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王洪军		24	158	7.0	12.0
2	赵明		84	509	11.0	19.0
3	杜小燕	首都医科大学基础医学院	55	242	10.0	12.0
4	马啸	首都医科大学基础医学院	3	4	1.0	1.0
5	陈振文	首都医科大学基础医学院	78	366	11.0	15.0
6	李益琛	首都医科大学基础医学院	2	1	1.0	1.0