慢病毒载体介导CD1d和GFP融合基因转染PANC-1细胞的实验研究

• 作者: 刘为军 师义 徐玉 王昆华 郭世奎 陈贤玉
• 来源期刊: 昆明医科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: CD1d基因 GFP基因 慢病毒 转染
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 31-34
• 页数: 4页
• 分类号: Q782
• 字数: 2232字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建人免疫基因CD1d与绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)融合基因慢病毒载体并转染人胰腺癌细胞(PANC-1).方法 实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增获得CD1d的全外显子片段,使之克隆到带GFP荧光报告基因慢病毒表达载体质粒中,慢病毒包装质粒和穿梭质粒转染293T细胞,包装成功后收集上清,浓缩,鉴定.通过慢病毒转染预实验确定MOI,进行人CD1d重组慢病毒载体转染胰腺癌PANC-1细胞株.结果 电泳鉴定结果与目的基因表达条带完全吻合,克隆测序结果与NCBI收录的CD1d基因序列完全一致.重组慢病毒质粒可高效转染PANC-1细胞,荧光显微镜下可观察到大量绿色荧光.结论 成功构建了CD1d与GFP融合基因慢病毒表达载体并转染人胰腺癌细胞.