WTX慢病毒载体及其稳转结肠癌细胞株Lovo/WTX-EGFP的建立

• 作者: 何绍烜 向东 张毅 李思齐 林丰 陈嘉勇
• 来源期刊: 中国普通外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 结肠肿瘤 基因,肿瘤抑制 WTX 慢病毒载体
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 159-164
• 分类号: R735.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.7659/j.issn.1005-6947.2013.02.007

摘要

目的:构建抑癌基因WTX慢病毒载体,建立稳定转导WTX的结肠癌Lovo/WTX-EGFP细胞株,为研究WTX在结肠癌中的作用机制提供有效工具.方法:通过Gateway技术构建WTX慢病毒载体pLV.Ex3d.null-EFl A＞WTX＞IRES/EGFP并通过菌落PCR筛选鉴定,将其与辅助质粒pLV/helper-SL3,PLV/helper-SL4,PLV/helper-SL5共转染293FT细胞包装慢病毒并在荧光显微镜下行滴度值测定.用WTX慢病毒载体转导结肠癌Lovo细胞株,并通过多次挑克隆培养建立稳定表达WTX的Lovo/WTX-EGFP细胞株.结果:Gateway技术构建的慢病毒载体pLV.Ex3d.null-EF1A＞WTX＞IRES/EGFP经鉴定完全正确；慢病毒包装48 h后视野下可见清晰绿色荧光表达,病毒滴度为5×107 TU/mL.慢病毒载体成功转导Lovo细胞,经qPCR及Western blot检测WTX表达水平明显升高；通过多次挑克隆培养成功建立了稳定转导WTX的Lovo/WTX-EGFP细胞株.结论:通过Gateway技术可成功构建WTX慢病毒载体并获稳定转导WTX的Lovo/WTX-EGFP细胞株,为研究WTX在结肠癌中的作用机制提供了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张毅	昆明医科大学第二附属医院急诊科	13	48	4.0	6.0
2	陈嘉勇	昆明医科大学第二附属医院急诊科	16	74	6.0	7.0
3	李思齐		10	38	5.0	6.0
7	向东	昆明医科大学第二附属医院急诊科	7	21	3.0	4.0
8	林丰	昆明医科大学第二附属医院急诊科	6	15	2.0	3.0
9	何绍烜	昆明医科大学第二附属医院急诊科	1	1	1.0	1.0