hTERT,CEA及CMV启动子在人结肠癌细胞株中的转录活性比较

• 作者: Rajendra Gurung 任燕飞 姚建峰 孙学军 张立 贺赛 郑见宝 陈南征 魏光兵
• 来源期刊: 中国普通外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 结肠肿瘤 转录启动子 转染
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 74-80
• 分类号: R735.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.7659/j.issn.1005-6947.2014.01.015

摘要

目的:比较人端粒酶催化亚单位(hTERT),癌胚抗原(CEA)及巨细胞病毒(CMV)启动子在人结肠癌细胞株LoVo和SW480中的转录活性.方法:设计引物应用PCR法从人结肠癌基因组中克隆hTERT和CEA启动子;用双酶切和PCR法切除原始载体pLVX-EGFP-3FLAG中的CMV启动子后,将hTERT,CEA启动子与该载体重组,构建出重组质粒pLVX-hTERTp-EGFP-3FLAG和pLVX-CEAp-EGFP-3FLAG;将上述两种质粒及原始载体(含CMV启动子)分别瞬时转染人结肠癌细胞株LoVo和SW480后,检测两种细胞株绿色荧光蛋白表达.结果:经PCR,酶切及测序鉴定,克隆及载体构建完全正确.CMV,hTERT及CEA启动子的转录活性(绿色荧光细胞数/总细胞数)在LoVo细胞中依次为54.7％,33.0％,9.5％;在SW480中依次为16.5％,10.1％,8.5％,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论:在人结肠癌细胞株中,转录活性以CMV启动子最高,hTERT启动子次之,CEA启动子最低.该结果可为结肠癌的靶向性基因治疗研究提供参考.