创伤弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体的制备及在食品检测中的应用

• 作者: 刘雪松 张海予 张琳 张蕾 曹栋 曾静 程晋霞 魏海燕
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 创伤弧菌 鞭毛蛋白 单克隆抗体 双抗夹心ELISA
• 年，卷（期）: 2013,（10）
• 所属期刊栏目: 抗体工程
• 页码范围: 1068-1071,1075
• 分类号: R392.11|R446.61|R378.3|Q813.2
• 语种: 中文

摘要

目的 制备创伤弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体(mAb)并建立双抗夹心ELISA.方法 采用差速离心法提取创伤弧菌ATCC 1.1758菌株的鞭毛蛋白,并以此为抗原免疫BALB/c小鼠,抗血清效价达到1∶32 000时,取脾细胞与生长良好的对数期Sp2/0骨髓瘤细胞进行融合.采用杂交瘤技术和ELISA制备并筛选分泌mAb的杂交瘤细胞株,有限稀释法对阳性孔克隆化培养.制备腹水,纯化以得到抗体.结果 获得5株持续、稳定分泌抗创伤弧菌鞭毛蛋白mAb的杂交瘤细胞株,命名为VVNo.1～VVNo.5,抗体效价高达1∶(2×106).SDS-PAGE结果显示,提取出的鞭毛蛋白相对分子质量(Mr)为44 000并且纯度较高.采用VVNo.5抗体建立了创伤弧菌双抗夹心ELISA,该方法的检测灵敏度达到103 CFU/mL菌液,通过采用12株创伤弧菌和130株非创伤弧菌进行特异性实验,12株创伤弧菌呈阳性反应,130株非创伤弧菌呈阴性反应,结果表明WNo.5抗体具有良好的特异性.在基质添加试验中,通过增菌,最低检出限为2 CFU/25 g样品.结论 成功制备了创伤弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体,并将其应用于双抗夹心ELISA,该方法的检测灵敏度达到1×103 CFU/mL菌液,与所测试的非目标菌没有交叉反应.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曹栋		6	113	4.0	6.0
2	张蕾		10	47	4.0	6.0
4	张海予		13	64	5.0	7.0
5	魏海燕		33	88	5.0	7.0
6	曾静		35	131	7.0	8.0
9	程晋霞		8	37	4.0	5.0
13	张琳		6	12	2.0	3.0
14	刘雪松		5	43	4.0	5.0