溶藻弧菌HY9901鞭毛蛋白flaB基因的克隆及原核表达

• 作者: 吴灶和 夏立群 梁海鹰 简纪常 鲁义善
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 溶藻弧菌 鞭毛蛋白 flaB基因 原核表达
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 页码范围: 139-146
• 页数: 8页
• 分类号: Q785|S917
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1231.2010.06136

摘要

参照GenBank上登录的弧菌鞭毛蛋白flaB基因序列设计引物,PCR扩增溶藻弧菌HY9901株的,flaB全长基因,序列分析结果显示该基因为1 134 bp,编码377个氨基酸.与GenBank中其它弧菌的同源基因序列比对显示,溶藻弧菌flaB基因与副溶血弧菌flaB基因的同源性最高(92%).将该基因定向克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达出带His-tag的融合蛋白,分子量大小与预期一致.优化的表达条件为28℃,0.4 mmol/L IPTG浓度诱导10 h.用纯化后的融合蛋白免疫SPF级小鼠,制备了多克隆抗体.Western-blotting结果表明鼠抗FlaB血清不仅能与诱导后的重组蛋白发生反应,而且能与天然的溶藻弧菌全菌蛋白发生反应,提示鞭毛蛋白FlaB可能是溶藻弧菌的重要保护性抗原之一,为下一步进行FlaB蛋白免疫原性的研究以及疫苗的制备奠定了基础.