小麦品种陕253γ-醇溶蛋白基因的克隆、原核表达与功能鉴定

• 作者: 李敏 李艳亮 王明霞 董剑 赵万春 陈其皎 高翔
• 来源期刊: 作物学报
• 关键词: 普通小麦 γ-醇溶蛋白 原核表达 粉质参数
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子遗传学
• 页码范围: 79-86
• 分类号: S5
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1006.2011.00079

摘要

利用设计合成的特异γ-醇溶蛋白基因引物,采用PCR方法从小麦品种陕253克隆获得一个γ-醇溶蛋白基因(GenBank登录号为GQ857626).序列分析表明,该基因编码产物的Ⅱ区由于碱基转换产生一个额外的半胱氨酸残基.构建了GQ857626的原核表达载体并转入表达菌株E.coli Rosetta gami B(DE3),IPTG诱导其成功表达.使用HisTrap HP组氨酸标记亲和层析柱纯化该基因的表达产物,并使用4 g粉质仪分析其功能.结果显示,将此纯化蛋白通过氧化还原反应整合到基础面粉后,面团的形成时间缩短,稳定时间减少,弱化度增加,导致主要的粉质指数明显下降,说明该亚基对面团流变学性质整体表现不利.