海南斑等蝎钾通道阻断剂 Im58的克隆、表达、纯化和鉴定

• 作者: 兰珍 尹世金 李羽欣
• 来源期刊: 中南民族大学学报（自然科学版）
• 学科: 工学
• 关键词: 钾离子通道阻断剂 Im58 原核表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 页码范围: 36-40
• 页数: 5页
• 分类号: TQ464.9|Q784
• 字数: 3602字
• 语种: 中文

摘要

为表达钾离子通道阻断剂Im58,设计了4条搭桥 PCR 引物,通过 overlap PCR 的方法扩增出蝎毒肽 Im58 DNA全长片段,选用表达载体pGEX-4T-1,将测序正确的克隆转化至大肠杆菌 E. coli/Rosetta(DE3)中.通过检测不同诱导时间和IPTG浓度下融合蛋白的表达量,筛选出最优表达条件.表达蛋白经 IPTG 诱导后,融合蛋白再经GSH亲和层析柱纯化,将洗脱液经超滤浓缩脱盐、纯化后得GST-Im58融合蛋白,蛋白用小肠激酶酶切后通过 RP-HPLC C18柱分离获得色谱纯的蝎毒肽.蝎毒肽通过 Tricine 系统的 SDS-PAGE 蛋白质电泳鉴定重组多肽的分子量大小和纯度,并由 MALDI-TOF-MS 来精确测定重组多肽的分子量.结果表明：Im58阳性克隆子证明成功构建了Im58原核表达载体,Tricine 系统的 SDS-PAGE 蛋白质电泳和MALDI-TOF-MS鉴定Im58多肽表达纯化成功.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	尹世金	中南民族大学生物医学工程学院	25	149	6.0	12.0
2	李羽欣	中南民族大学生物医学工程学院	4	7	2.0	2.0
3	兰珍	中南民族大学生物医学工程学院	2	6	2.0	2.0