人造血转录因子GATA-1的克隆、表达及其对间质细胞的生物学作用

• 作者: 南雪 周军年 岳文 张文成 房芳 曾泉 王思涵 王静雪 裴雪涛
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 造血转录因子 GATA-1 间质细胞 增殖
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 597-603
• 页数: 7页
• 分类号: Q78|Q2
• 字数: 5976字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2013.05.001

摘要

目的：：构建人GATA-1全长过表达载体，对其进行过表达，并初步探讨其在人非造血细胞（人脐静脉内皮细胞、人成纤维细胞）中的生物学作用。方法：以人脐带血cDNA为模板，采用高保真PCR获得GATA-1的CDS序列，连接至pGEM-T Easy载体，构建pBPLV-GATA1慢病毒表达质粒，并对上述载体进行NheⅠ、XbaⅠ双酶切和测序鉴定，鉴定正确后，在293T细胞中进行慢病毒包装，浓缩病毒后，对我们原代分离培养的人脐静脉内皮细胞和成纤维细胞进行慢病毒感染，采用流式分选对阳性目的细胞进行纯化，阳性细胞扩增后进行Western印迹鉴定；以人包皮成纤维细胞（HFF）为研究对象，在光学及荧光显微镜下观察细胞形态变化情况，CCK-8法检测细胞增殖情况，流式细胞术检测细胞表面标志表达情况。结果：双酶切和测序结果表明克隆了1242 bp的人GATA-1全长CDS序列，经Western印迹检测，GATA-1在293T细胞中获得瞬时表达；获得了人GATA-1稳转细胞株，对稳转细胞株的检测表明，GATA-1对HFF细胞增殖具有一定的抑制作用，但对HFF细胞形态及细胞表面标志CD90、CD29的表达无明显影响。结论：构建了人GATA-1慢病毒表达载体及其稳转细胞株，GATA-1蛋白对间质细胞的增殖有一定的抑制作用。