猪Cdk2基因的克隆及其功能研究

• 作者: 刘长明 危艳武 唐青海 张辉
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪Cdk2 基因克隆 细胞周期 细胞增殖
• 年，卷（期）: 2013,（10）
• 所属期刊栏目: 遗传繁育
• 页码范围: 1522-1531
• 页数: 10页
• 分类号: S828|S813.3
• 字数: 5595字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2013.10.003

摘要

本研究旨在克隆猪Cdk2基因,并研究其编码蛋白CDK2的生物学功能.采用RT-PCR扩增猪Cdk2基因,运用生物信息学软件分析其核苷酸和编码氨基酸特征,并预测编码蛋白的生物学功能;利用半定量RT-PCR方法分析该基因在猪各个脏器和组织中的表达情况;共聚焦显微镜观察CDK2的亚细胞定位,采用过表达和shRNA干扰技术研究CDK2在细胞周期和细胞增殖中的调控作用.结果表明,猪Cdk2基因开放阅读框(ORF)为897 bp(GenBank:JX967576),该基因与绵羊、牛、山羊、人、金仓鼠、小鼠、仓鼠和沟鼠Cdk2的核苷酸相似性依次为94.2％、94.0％、93.8％、93.4％、91.8％、91.0％、90.6％和89.9％,与牛、山羊和绵羊的亲缘关系最近;Cdk2编码298 aa,CDK2分子质量为34 ku.Cdk2 mRNA在猪10个不同脏器和组织中均有表达.CDK2定位于细胞质和细胞核中,并通过蛋白酶体途径降解.猪CDK2在PK-15细胞中过表达引起S期细胞比例显著减少及G2/M期细胞比例显著增加(P＜0.05),而G0/G1期无显著变化;相反,CDK2表达量降低引起S期细胞比例显著减少及G0/G1期细胞比例显著增加,而G2/M期无显著变化.本研究成功克隆了猪Cdk2基因并对其编码蛋白生物学功能进行了初步研究.