两种实时定量RT-PCR方法检测miRNAs表达的技术分析

• 作者: 吕社民 宁启兰 张蕊 杜小云 郑悦雯 钟楠楠 闵自信 韩燕
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: miRNAs 茎环引物 实时定量反转录聚合酶链反应 软骨 血浆
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 258-262
• 页数: 5页
• 分类号: R34
• 语种: 中文

摘要

目的 比较两种实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)方法检测microRNAs (miRNAs)表达含量的技术差异,优化不同实验目的和条件下研究miRNAs表达的技术方法.方法 取21d和42d两个时间点的SD大鼠关节软骨组织,采用Trizol法提取总RNA备用.选取rno-miR-15b、rno-miR-16、rno miR 195、rno-miR-497作为研究对象,分别用茎环引物和试剂公司提供的试剂盒方法反转录总RNA,并应用实时定量PCR方法检测这些miRNAs的表达量.提取人血浆中总RNA,用上述两种RT-qPCR方法实时定量检测has-miR-16的表达量.结果 两种方法检测这些miRNAs表达量,在大鼠21d和42 d这两个时间点其表达量变化趋势相同,都呈现增高的趋势,这与我们前期Solexa测序结果相同.在血浆中的结果显示,其中茎环引物反转录方法灵敏度相对较高.结论 茎环引物法在少量几个重要的miRNAs检测中具有优势,而试剂盒方法适用于大量miRNAs的筛查.