乙肝治疗性可复制型DNA疫苗pSVK-HBVA高稳定宿主菌的筛选及其基础培养基的选择

• 作者: 于继云 侯沙沙 吴昊 张亮 张巍 徐元基 朱晓明 李盼 王启宇 王宇 王琳 阎瑾琦
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: 肝炎,乙型 疫苗,DNA 高稳定性 宿主菌 XL10-Gold 基础培养基
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 363-367
• 页数: 5页
• 分类号: R512.6
• 字数: 5186字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2013.05.011

摘要

目的 为乙肝治疗性可复制型DNA疫苗质粒pSVK-HBVA筛选稳定性高,能多次传代的宿主菌,以满足中试工艺的要求,同时对该工程菌最适的基础发酵培养基进行选择.方法 将质粒pSVK-HBVA分别转化几种不同的大肠杆菌感受态细胞并提取质粒,通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的形态结构,连续传代法对工程菌的稳定性进行检测;选取质粒含量最高和稳定性最好的工程菌作为原始种子,按照2010版<中国药典>要求建立工程菌的三级种子批,并对种子批进行鉴定.同时,从LB,TB,M9(甘油),M9(葡萄糖)4种培养基中为工程菌筛选质粒产量最高的基础发酵培养基.结果 经过筛选发现,在以大肠杆菌XL10-Gold为宿主菌时,质粒pSVK-HBVA表现出了同常规质粒DNA类似的稳定性,转接传代30次也未发生重组或片段丢失,能满足后续中试工艺的要求,LB作为基础培养基能得到最高的质粒容积产率为5.5 mg/L.结论 大肠杆菌XL10-Gold是一个更利于可复制型DNA疫苗质粒pSVK-HBVA扩增的宿主菌,该工程菌发酵的最佳基础培养基是LB培养基.