微小隐孢子虫cDNA文库的构建与免疫学筛选

• 作者: 姜宁 尹继刚 张静 陆慧君 陈启军 韩福松 高依然
• 来源期刊: 西北农林科技大学学报（自然科学版）
• 学科: 农学
• 关键词: 微小隐孢子虫 cDNA文库构建 免疫学筛选
• 年，卷（期）: 2013,（8）
• 所属期刊栏目: 动物医学
• 页码范围: 7-12
• 页数: 6页
• 分类号: S852.72+3
• 字数: 4978字
• 语种: 中文

摘要

[目的]构建微小隐孢子虫cDNA文库,以筛选出可替代天然抗原用于诊断的重组抗原.[方法]首先纯化微小隐孢子虫卵囊,用Trizol Reagent提取总RNA,构建全长cDNA;分别用蛋白酶K与Sfi消化、酶切处理cDNA,采用Column Spin H-1000分离柱分离cDNA,连接λTriplEx2载体,构建cDNA文库.扩增cDNA文库,用兔抗微小隐孢子虫血清作探针对cDNA文库进行初筛和复筛,将复筛得到的阳性克隆连接PMD18-T载体,测序后进行序列比对.[结果]微小隐孢子虫cDNA文库噬菌斑插入片段长度为1.5 kb左右,库容大于107.经过筛选共获得了20个微小隐孢子虫阳性克隆,测序后从中选出了4个主要免疫识别抗原蛋白,分别为MUCIN蛋白、乳酸脱氢酶、微管相关蛋白和子孢子抗原蛋白.[结论]成功构建了微小隐孢子虫cDNA文库,并筛选出了4个主要免疫识别抗原蛋白,为隐孢子虫的血清学诊断提供了重组抗原.