莫氏巴贝斯虫裂殖子cDNA表达文库的构建及免疫学筛选

• 作者: 任巧云 关贵全 刘军龙 刘志杰 刘爱红 李有全 杨吉飞 殷宏 牛庆丽 王锦明 罗建勋 马米玲
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 莫斯巴贝斯虫 cDNA表达文库 免疫筛选 RACE
• 年，卷（期）: 2012,（12）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 1931-1937
• 页数: 7页
• 分类号: S852.723
• 字数: 4645字
• 语种: 中文

摘要

为了构建莫氏巴贝斯虫(Babesia motasi)裂殖子cDNA表达文库,从中筛选和鉴定功能基因,利用差速离心法从莫氏巴贝斯虫感染的红细胞中纯化裂殖子,提取总RNA并纯化mRNA.在合成的双链cDNA两端加上含EcoRⅠ和Hind Ⅲ定向接头后连接到λ SCREEN载体上.通过体外包装形成完整的噬菌体颗粒,并用之转染ER1647,构建莫氏巴贝斯虫裂殖子的cDNA表达文库.用莫氏巴贝斯虫阳性血清筛选cDNA文库,获得的阳性克隆,经过测序和Blast软件分析鉴定,然后利用末端快速扩增技术(RACE)对筛选到的功能基因片段进行全长扩增.结果表明构建的cDNA表达文库其初级库容量约为1.0×106 PFU,扩增文库为3.5×109 PFU;通过免疫学筛选,获得50个阳性克隆.测序和Blast分析后,鉴定出10个莫氏巴贝斯虫基因片段,RACE扩增获得了其中8个基因的全长.本试验构建的莫氏巴贝斯虫裂殖子的cDNA表达文库和筛选到的10个结构和功能基因,为研究巴贝斯虫生物学特性、筛选疫苗与诊断用抗原及药物靶位奠定了基础.