吕氏泰勒虫cDNA表达文库的构建及其抗原基因的免疫筛选

• 作者: 任巧云 党志胜 关贵全 刘光远 刘军龙 刘志杰 刘爱红 李有全 殷宏 白启 罗建勋 马米玲 高金亮 鲁炳义
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 吕氏泰勒虫 cDNA表达文库 构建 免疫筛选
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 兽医
• 页码范围: 331-339
• 页数: 9页
• 分类号: S8
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2009.01.043

摘要

[目的]构建吕氏泰勒虫裂殖子cDNA表达文库,并从中筛选抗原候选基因.[方法]从吕氏泰勒虫裂殖子直接提取和纯化mRNA,采用oligo(dT)引物合成双链cDNA,并在其两端加EcoR Ⅰ/HindⅢ定向接头.将所产生的cDNA分子定向克隆到具有EcoR Ⅰ/HindⅢ粘性末端的入SCREEN载体的两臂之间.用PhageMaker extract对连接产物进行体外包装以形成完整的噬菌体,并用之转染大肠杆菌ER1647,从而构建成吕氏泰勒虫的cDNA表达文库.用吕氏泰勒虫阳性血清和兔抗绵羊IgG-AP筛选得到阳性克隆,经测序和Biast软件分析并获得新基因.[结果]成功构建吕氏泰勒虫裂殖子cDNA表达文库,其初级库容量约为1.0×10-6 PFU,扩增文库的滴度为8.2×108PFU·ml-1,文库重组率为100%;通过免疫学筛选、测序和Blast软件分析,共获得30个新基因,其中15个基因已登录GenBank/NCBI.[结论]为研究泰勒虫疫苗、新型医药和诊断抗原,以及发展可持续性防制羊泰勒虫病提供基本材料.