海洋细菌QDC01的鉴定及其几丁质酶基因的克隆与分析

• 作者: 刘伟成 吴慧玲 张殿朋 杨晨 王振东 罗春艳
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 关键词: 嗜水气单胞菌 分类鉴定 几丁质酶基因 克隆与分析
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 734-744
• 页数: 11页
• 字数: 7487字
• 语种: 中文

摘要

海洋微生物是几丁质酶的重要来源.本研究从青岛海域海蜇(Rhopilema esculenta)体中分离到一株产几丁质酶的细菌QDC01,通过形态、培养特征以及16S rDNA序列同源性分析,将该菌株鉴定为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila).根据已报道的嗜水气单胞菌几丁质酶基因相关序列设计引物,克隆了QDC01几丁质酶基因,命名为ahchi(GenBank:JX863407).应用生物信息学软件对获得的基因序列及编码的蛋白序列进行分析,结果显示,ahchi开放阅读框(ORF)长2 100 bp,无内含子,其编码的蛋白由699个氨基酸组成,分子量为74.875 kD,等电点为5.81.序列比对和同源性分析结果表明,该基因与嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila subsp.hydrophila)ATCC 7966T几丁质酶基因(GenBank登录号:CP000462)的相似性最高,为98％；相应的氨基酸序列同源性为98％.系统进化分析以及Ahchi的保守结构域分析表明,Ahchi属于Ⅰ型几丁质酶,糖苷水解酶19家族.采用限制性内切酶(BamH Ⅰ和HindⅢ)双酶切法构建了原核表达载体pET-30a(+)-ahchi,并经IPTG诱导在大肠杆菌(Escherichia coli)中成功表达.在基础产酶发酵条件下,菌株QDC01所产粗酶液酶活力达0.21 U/mL,采用文献报道的优化产酶发酵条件,菌株QDC01所产粗酶液酶活力可达0.58 U/mL,是前人报道的产几丁质酶嗜水气单胞菌SWCH-6所产酶活力的1.49倍,同时也高于已报道的气单胞菌(Aeromonas sp.)CJ-5的酶活力(0.41 U/mL),为微生物源几丁质酶开发应用提供了又一优良种质资源.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘伟成	北京市农林科学院植物保护环境保护研究所	78	836	16.0	25.0
2	王振东	沈阳农业大学生物科学技术学院	39	231	9.0	13.0
3	吴慧玲	北京市农林科学院植物保护环境保护研究所	15	43	5.0	6.0
4	张殿朋	北京市农林科学院植物保护环境保护研究所	21	161	8.0	11.0
5	罗春艳	沈阳农业大学生物科学技术学院	1	8	1.0	1.0
9	杨晨	北京市农林科学院植物保护环境保护研究所	1	8	1.0	1.0