粉尘螨第十六类变应原的克隆表达、纯化及免疫原性鉴定

• 作者: 刘志刚 吴莹莹 李维中 王月明 邬玉兰
• 来源期刊: 南昌大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 粉尘螨 Derf16 克隆 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2013,（12）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 7-10,15
• 页数: 5页
• 分类号: R392.8
• 字数: 3087字
• 语种: 中文

摘要

目的 获得大量具有良好IgE结合活性的粉尘螨第十六类变应原(Der f16)的重组变应原,以促进粉尘螨变态反应性疾病的特异性诊断及治疗的研究.方法 挑取经纯培养的粉尘螨,提取总RNA,根据已知Der f16基因序列设计引物,经RT-PCR扩增Der f16基因片段,产物连入pMD32-T载体中.扩增后,利用限制性内切酶EcoR Ⅰ和XhoⅠ双酶切将目的 基因片段连接到pET32a表达载体上,转化到大肠杆菌(E.coli BL21)中经IPTG诱导表达.表达载体经亲和层析纯化,SDS-PAGE检测蛋白纯度,Western bolt检测变应原免疫学活性.结果 以粉尘螨总RNA为模板成功克隆出Der f16基因,与数据库中Der f16基因同源性为100%;经IPTG诱导后,大肠杆菌大量表达Der f16蛋白,所获得的重组蛋白分子质量为73 ku,上清及沉淀物均有蛋白表达,且上清表达量高于沉淀物.重组Der f16能够与螨过敏患者血清中的IgE 反应,而不与健康者血清中的IgE反应.结论成功构建了Der f16的原核表达载体,并高效表达和纯化出具有免疫原性的Der f16重组蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邬玉兰	深圳大学医学院过敏反应与免疫学研究所	36	133	6.0	8.0
2	刘志刚	深圳大学医学院过敏反应与免疫学研究所	324	1724	17.0	23.0
6	吴莹莹	深圳大学医学院过敏反应与免疫学研究所	5	29	4.0	5.0
7	李维中	深圳大学医学院过敏反应与免疫学研究所	2	5	1.0	2.0