大豆天冬酰胺合成酶β基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

• 作者: 于丹 向文胜 张继 王晴 王相晶
• 来源期刊: 东北农业大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 天冬酰胺合成酶B 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2013,（7）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 17-21
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 字数: 3569字
• 语种: 中文

摘要

根据GenBank登陆大豆天冬酰胺合成酶(AS-B)基因序列(登录号:GMU55874)设计特异引物,通过PCR扩增从大豆(Glycine max) cDNA中克隆出AS-B基因.将该基因克隆到pET30a(+)载体,构建重组表达载体pET30a-AS,转化大肠杆菌Rosetta(DE3) pLysS,并进行表达条件优化.结果表明,在16℃条件下,经0.5mmol· L-1 IPTG诱导14 h,大部分重组AS-B以可溶性蛋白的形式存在.经Ni-NTA亲和层析和Sephadex G50脱盐后,重组蛋白产率为23.4 mg· L-1,纯度＞90％,以L-谷氨酰胺和NH4Cl为氮源供体时,其比活力分别为2.32和2.60 μmol· min-1 ·mg1.研究结果为研究大豆AS-B结构与功能和酶催化动力学机制及建立AS-B抑制荆的高通量筛选平台奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	向文胜	东北农业大学生命科学学院	75	943	16.0	28.0
2	王相晶	东北农业大学生命科学学院	57	480	13.0	18.0
3	王晴	东北农业大学生命科学学院	26	482	8.0	21.0
4	张继	东北农业大学生命科学学院	4	9	2.0	2.0
5	于丹		5	4	2.0	2.0