盐角草Cu/Zn-SOD基因的克隆及耐盐性分析

• 作者: 余梅 吉虎 徐凯 李娟 王先磊 王荣富 臧洁 鲁茂龙
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 关键词: 盐角草 超氧化物歧化酶 基因克隆 耐盐性
• 年，卷（期）: 2013,（7）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 847-854
• 页数: 8页
• 字数: 4820字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2013.07.011

摘要

盐角草(Salicornia europaea)是一种典型的耐盐植物,为了研究盐角草Cu/Zn-SOD基因在的盐胁迫耐受中的机制,本研究利用己知植物Cu/Zn-SOD基因的保守序列设计简并引物,采用RACE技术的方法从盐角草中扩增获得Cu/Zn-SOD基因.使用生物学软件分析其氨基酸序列,并进行同源性比对.构建原核表达载体,转化大肠杆菌(Escherichia coli),使目的蛋白在重组菌中表达,并分析了不同盐浓度并含有抗生素的液体LB培养基中菌的生长情况,IPTG诱导表达,通过测定OD600值来分析Cu/Zn-SOD基因的耐盐功能.结果通过简并引物PCR扩增和RACE技术,克隆出盐角草Cu/Zn-SOD基因.盐角草Cu/Zn-SOD基因(GenBank登录号:JQ074238.2)全长为660bp,开放阅读框长为459 bp,推测编码152个氨基酸,蛋白分子量约为15.1 kD,其氨基酸序列与碱蓬(Suaeda salsa)的序列相似性为96％,与黄灯笼辣椒(Capsicum chinense)的序列相似性为88％.生物学软件分析表明Cu/Zn-SOD蛋白可能存在于细胞质.构建原核表达载体pET-Cu/Zn-SOD和对照pETDuet-1,转化大肠杆菌BL21中.蛋白经IPTG诱导表达.经SDS-PAGE蛋白电泳检测发现表达蛋白条带大小与预期一致,说明目的蛋白成功表达.耐盐性分析表明重组菌BL21 (pET-Cu/Zn-SOD)在高盐度培养基中的生长明显优于对照菌BL21 (pETDuet-1),说明盐角草Cu/Zn-SOD基因可能在盐胁迫逆境中起到耐受性作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王荣富	安徽农业大学生物技术中心	81	1328	17.0	33.0
2	徐凯	安徽农业大学生物技术中心	20	621	13.0	20.0
3	余梅	安徽农业大学生物技术中心	17	42	4.0	5.0
4	李娟	安徽农业大学生物技术中心	34	202	8.0	13.0
5	吉虎	安徽农业大学生物技术中心	3	14	1.0	3.0
6	臧洁	安徽农业大学生物技术中心	3	14	1.0	3.0