前半胱天冬酶-1及活性位点突变真核表达载体的构建、表达及生物活性鉴定

• 作者: 张艳红 张部昌 汪莹 王文军 郑子瑞 钟辉 魏从文
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 前半胱天冬酶-1 C285A突变 炎症反应 IL-1β
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 102-105,109
• 页数: 5页
• 分类号: Q753
• 字数: 3973字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2013.02.005

摘要

目的 构建和表达前半胱天冬酶(procaspase)-1及其活性位点C285A突变真核表达载体,并检测其生物学活性.方法 从人胚肾细胞系HEK293中提取总RNA,逆转录后,PCR获得前半胱天冬酶-1全长DNA,并通过重组PCR获得其酶活性位点突变片段,酶切连接到载体pcDNA3-Flag中,经鉴定将阳性克隆测序；脂质体转染两种载体到HEK293中表达,用免疫印迹检测目的蛋白的表达,并用酶联免疫吸附方法检测在病原菌毒力蛋白刺激下,前半胱天冬酶-1及C285A对IL-1β分泌的影响.结果 构建的2种真核表达载体能够在HEK293中很好表达,当前半胱天冬酶-1过表达时,病原菌毒力蛋白可以刺激IL-1β的分泌,而C285A酶活性位点突变之后,IL-1β的分泌明显降低.结论 构建重组的pcDNA3-Flag-procaspase-1具有生物学活性,而C285A突变导致前半胱天冬酶1丧失切割底物的功能,且使IL-1β的分泌明显降低.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张艳红	军事医学科学院生物工程研究所	25	61	4.0	6.0
2	钟辉	军事医学科学院生物工程研究所	47	246	8.0	14.0
3	张部昌	安徽大学生命科学学院	82	550	12.0	20.0
4	魏从文	军事医学科学院生物工程研究所	9	12	2.0	2.0
5	汪莹	安徽大学生命科学学院	4	3	1.0	1.0
9	王文军	安徽大学生命科学学院	1	2	1.0	1.0
13	郑子瑞	军事医学科学院生物工程研究所	3	39	2.0	3.0